پایان نامه آماده سازی محیط کشت(رشته کشاورزی)

اختصاصی از یارا فایل پایان نامه آماده سازی محیط کشت(رشته کشاورزی) دانلود با لینک مستقیم و پرسرعت .

 

فرمت:word(قابل ویرایش)

تعداد صفحات:105

فهرست مطالب:

آماده سازی محیط کشت.. ۳

۳-۱ ترکیبات محیط کشت.. ۳

۳-۱-۱ عوامل تولیدکنندة ژل و جایگزینی آنها ۶

۳-۱-۱-۱ آگار و دیگر مواد تولید کننده ژل. ۶

۳-۱-۱-۲ حمایت کننده های فیزیکی. ۱۱

۳-۲-۱ سیستم های کشت مایع در مقابل جامد ۱۲

۳-۱-۳ عناصر پرمصرف.. ۱۴

۳-۱-۳-۱ نیتروژن. ۱۵

۳-۱-۲-۲- کلسیم ۱۶

۳-۱-۳-۳ منیزیم ۱۷

۳-۱-۳-۴ پتاسیم ۱۷

۳-۱-۳-۵ فسفر. ۱۸

۳-۱-۳-۶ سولفور. ۱۹

۳-۱-۳-۷ سدیم ۱۹

۳-۱-۳-۸ کلر. ۲۰

۳-۱-۴-۱ آهن. ۲۱

۳-۱-۴-۲ منگنز. ۲۲

۳-۱-۴-۳ بر. ۲۳

۳-۱-۴-۴- روی.. ۲۴

۳-۱-۴-۵ مس: ۲۵

۳-۱-۴-۶ ید ۲۶

۳-۱-۴-۷  مولیبدن. ۲۶

۳-۱-۴-۸ کبالت.. ۲۷

۳-۱-۴-۹ نیکل. ۲۷

۳-۵-۱ تکمیل کننده های آلی. ۲۸

۳-۱-۵-۱ ویتامینها ۲۸

۳-۱-۵-۳ اسیدهای آمینه. ۳۰

۳-۱-۵-۳ شیر نارگیل و سایر محصولات طبیعی. ۳۲

۳-۱-۶ تنظیم کننده های رشد ۳۴

۳-۱-۶-۱ اکسینها ۳۶

۳-۶-۱-۲ سیتوکینینها ۳۶

۳-۱-۶-۳ جیبرلینها ۳۸

۳-۱-۶-۴ اسیدآبسیسیک… ۳۹

۳-۱-۶-۵ اتیلن و سایر تنظیم کننده های گازی.. ۴۰

۲-۱-۶-۶ سایر محرکهای طبیعی و مصنوعی( سنتتیک) ۴۱

۳-۱-۶-۷ دیگر بازدارنده های طبیعی و مصنوعی. ۴۲

۳-۱-۶-۷ دیگر بازدارندهای طبیعی و مصنوعی. ۴۳

۳-۱-۶-۸ برخی اوقات تنشها شبیه تنظیم کننده های رشد عمل می  کنند ۴۵

۳-۷-۱ کربوهیدارتها ۴۶

۳-۸-۱ زغال فعال. ۴۷

۳-۱-۱۰ Ph  و بافرها ۴۷

۳-۱-۱۱ آنتی اکسیدانها ۴۹

۳-۲ ظروف کشت و مواد بسته بندی.. ۵۰

۳-۲-۱ ظروف.. ۵۰

۳-۲-۲ دربندها ۵۳

فصل چهارم ۵۵

جمع آوری نمونه گیاهی نحوة استریل کردن، برش و کشت آن. ۵۵

۴-۱ وضعیت مواد گیاهی. ۵۵

۴-۱-۱ مواد گیاهی گلخانه ای.. ۵۶

۴-۱-۲ مواد گیاهی مزرعه ای.. ۵۸

۴-۳-۱ اثر ژئوتیپ.. ۵۹

۴-۲ جمع آوری و نگهداری.. ۶۰

۴-۳- ضدعفونی سطحی. ۶۲

۴-۴ برش و انتقال بافتها ۶۳

۴-۵ قهوه ای شدن طی دوره کشت و واکشت.. ۶۴

۴-۶-  شرایط محیطی انکوباسیون. ۶۵

۴-۶-۲ نور. ۶۶

تکثیر کلونی. ۶۷

۵-۱ اصول کلی. ۶۷

۵-۱-۱ چرا کلون کردن؟. ۶۷

۵-۱-۲ مشکلات مربوط به کلون کردن. ۶۷

۵-۱-۳ تکنیک های کلون کردن رایج در مقابل کلون به روش این ویترو. ۶۸

۵-۴-۱ انواع ریزازدیادی.. ۷۰

۵-۱-۴-۱ رشدطولی – ساقه جانبی. ۷۱

۵-۱-۴-۲ اندام زایی. ۷۱

۵-۱-۴-۳ جنین زایی سوماتیکی. ۷۲

۵-۱-۵ کارکرد کلونهای جوان و پایه های مادری بالغ در برنامه ای به نژادی درختان. ۷۴

۵-۲ القای اندام زایی و جنین زایی در مواد گیاهی جوان. ۷۶

۵-۲-۱ القای ساقه. ۷۶

۵-۲-۱-۱ القای ساقه در جنین بالغ و ریزنمونه های حاصل از گیاهچه بازدانگان. ۷۶

۵-۲-۱-۲ ایجاد ساقه در جنین بالغ و ریزنمونه های گیاهچه ای نهان دانگان. ۸۱

۵-۲-۲ جنین زایی. ۸۳

۵-۲-۲-۱ جنین زایی در ریزنمونه های جنین نابالغ بازدانگان. ۸۴

۵-۲-۲-۲ جنین زایی در ریزنمونه های جنین بالغ و گیاهچه های جوان بازدانگان. ۸۵

۵-۲-۲-۳ جنین زایی در ریزنمونه های جنینی نابالغ نهان دانگان. ۸۷

۵-۲-۲-۴ جنین زایی درجنین بالغ و ریزنمونه های حاصل از گیاهچه های جوان نهان دانگان. ۸۸

۵-۳- انگیزش اندام زایی و جنین زایی در مواد گیاهی بالغ. ۹۰

۵-۳-۱ اهداف ریزازدیادی مواد گیاهی بالغ. ۹۰

۵-۳-۲ ریزازدیادی گونه هایی که به آسانی تکثیر می شوند ۹۱

۵-۳-۳ ریزازدیادی گونه های سرسخت.. ۹۲

۵-۳-۳-۱ انتخاب ریزنمونه. ۹۲

۵-۳-۳-۲ پیش تیمار جوان سازی.. ۹۴

۵-۳-۳-۳ جوان سازی در این ویترو. ۹۵

۵-۴- اداره کشت پس از شروع رشد ۹۸

۵-۴-۱ رشد طولی ساقه های ریزازدیادی شده ۹۸

۵-۴-۲ شیشه ای شدن. ۱۰۰

۵-۴-۳ ریشه زایی ساقه ها ۱۰۲

۵-۴-۳-۱ ریشه زایی در این ویترو. ۱۰۴

چکیده:

بطور آشکار محیط کشت غذایی عامل مهم در کشت بافت و سلول بشمار می آید، البته برای هر کدام از گونه های درختی آزمایش های فاکتوریل که در آنها کلیه مواد شیمیایی محیط کشت در طیف وسیعی از غلظت های متغیر باشند، انجام نگرفته است. برای انجام چنین تحقیقی به امکاناتی بیش از آنچه که در اکثر آزمایشگاهها موجود است نیاز می باشد.

آنچه که طراحی محیط کشت را بطور خاصی مشکل می کند، اثرات متقابل بسیار پیچیده مواد شیمیایی مختلف در یک محیط کشت غذایی مشخص می باشد. بعنوان مثال کاربرد بعضی از قندها ر محیط کشت سبب کمبود بر می شود. پیچیده تر از آن حالتی است که بر بیش از حد نیاز وجود داشته باشد در این حالت نیاز بافت به کلسیم کاهش خواهد یافت. به دلیل وجود چنی اثر متقابلی، تعیین ترکیبات مطلوب محیط کشت از طریق آزمایشهای فاکتوریل مشکل است. از طرفی این وضعیت با درنظر گرفتن این حقیقت که اثرات متقابل بین بافت و مواد غذایی تحت تأثیر شرایط محیطی از قبیل شدت و کیفیت نور، دوره نوری، درجه حرارت، آگار یا مایع بودن محیط کشت، PH، و غیره قرار می گیرند پیچید تر می گردد. بعلاوه عکس العمل بافت با تغیر وضعیت فیزیولوژیکی ریز نمونه با بافتی که واکشت شده فرق می کند.

محیط کشت های اولیه که در کشت بافت بکار می رود محلول های غذایی تغییر یافته کشت آبکشت گیاهان بود( محلول های غذایی ناپ، ففر و هوگلند- جورج و شرینتگتن) به این مواد مخلوطی از اسیدهای آمینه، ویتامینها و سایر ترکیبات آلی اضافه می شد. امروزه اکثر کشتهایی که استفاده می شوند نوع تغییر یافته محیط های قدیمی هستند با بررسی فهرستی مشتمل بر 260 محیط کشت بافت گیاهی تنها 39 محیط کشت دارای ترکیبات پایه بودند محیط کشت موراشی و اسکوک (MS )[1]بین سایر محیط کشت های گیاهی بیشترین کاربرد را دارد. از میان محیط کشت های ذکر شده توسط جرج و شرینتگتن، 53 محیط کشت از نظر فرمول عناصر پرمصرف مشابه محیط کشت MS بودند ولی در قسمت های دیگر تفاوت داشتند.

اکثر محیط کشت ها از طریق آزمون و خطا بتدریج بهبود یافته اند. البته در برخی از محیط کشت ها روش تجربی کمتر بکار رفته است. مقدار مواد معدنی موجود د محیط کشت MS براساس تجزیه خاکستر بافت توتون سوزانده شده می باشد. محیط کشت LM که اغلب برای سونی برگها استفاده می شود براساس تجزیه ترکیب شیمیایی آرکگونهای بذر نابالغ Pseudostsuha menziesii است البته هیچ گونه تضمینی وجود ندارد که این محیط کشت ها برای تمام ژئوتیپ ها مطلوب باشند یا اینکه چنین تجزیه شیمیایی برای تمام انواع بافتهای گونه های مختلف انجام شده باشد. محیط کشت موردنیاز جهت رشد کالوس نسبت به محیط کشت برای ایجاد و رشد ساقه بایستی دارای مواد معدنی با غلظت بیشتری باشد در حالیکه محیط کشت موردنیاز جهت ایجاد و رشد ریشه فرق می کند محیط کشتی که برای کشت پروتوپلاست بکار می رود اغلب با محیط کشتی که برای پروتوپلاست استفاده می شود بطور کامل تفاوت دارد. از طرف دیگر گونه هایی وجود دارد که درطیف وسیعی از محیط کشت های بخوبی رشد می کنند؛ یعنی محیط کشتهای مطلوب و مشخصی برای اینها وجود ندارد. همچنین حالت هایی و جود دارند که در آنها تهیه یک ژئوتیپ مناسب از تهیه یک محیط کشت مطلوب و دقیق مهمتر است. چنین حالتی برای جنس Populus وجود دارد. بعضی از ژئوتیپهای این جنس روی محیطهای آزمایش شده خیلی ضعیف رشد می کنند در برخی از گونه ها هر رقم دارای نیازهای غذایی مخصوص به خود است.

جرج و همکاران براساس مواد تشکیل دهنده، محیط کشت بافتهای گیاهی را به چهار دسته عمده، عناصر پرمصرف، عناصر کم مصرف، ویتامینها و اسیدهای آمینه یا آمیدها تقسیم کرده اند. برخی از محیط کشت ها مانند وایت، موراشی واسکوگ، گامبور و همکاران(B5 ) لیتوی و لوید و مک کاون محیط کشت های پایه[2] یا تقریباً پایه هستند. بسیاری از محیط کشتهای مورد استفاده دیگر آنهایی هستند که در اثر تغییر کلی یا جزئی محیط کشت های پایه حاصل شده اند.

عناصر پرمصرف محیط کشت موراشی و اسکوگ اغلب در حد یا غلظت محیط پایه رقیق می شوند به همین ترتیب چنین کاری در سایر محیط کشت ها که غلظت عناصر در آنها بالاست انجام می گیرد.

علاوه بر طبقه بندی محیط کشتهای ذکرشده در بالا محیط کشتها را می توان به دو حالت مایع و جامد نیز تقسیم کرد. در حالت جامد محیط دارای عامل ژله کننده است که بافت کشت شده را روی سطح محیط نگه می دارد. این محیط کشتها همچنین درای ویتامینها، اسیدهای آمینه، تنظیم کننده های رشد کربوهیدراتها و اغلب سایز مواد تشکیل دهنده موردنیاز نیز هست.

3-1-1 عوامل تولیدکننده ژل و جایگزینی آنها

3-1-1-1 آگار و دیگر مواد تولید کننده ژل

آگار از رایجترین عامل تولید ژل است که در محیط کشت استفاده می شود. آگار پلی ساکاریید هایی پیچیده است که از برخی گونه های نوعی علف هرز دریایی بدست می آید آگار طی مراحل ساخت در جات متفاوتی از خلوص را طی میکند. ولی مقداری ناخالصیهای آلی و معدنی در آن باقی می ماند. دیفکوباکتوآگار از رایجترین آگار مصرفی در کشت بافت است که دارای مقدار زیادی سدیم و مس می باشد. میزان سدیمی که از طریق آگار در محیط کشت وارد می شود براحتی توسط بافت اکثر گیاهان تحمل می شود. اما گاهی اوقات مس در محیط کشت ایجاد سمیت می کند. محققان اغلب آگار را در غلظت های بین 5/0 و 1 درصد بکار می برند غلظت مناسب آگار برای هر نوع محیط کشت ریز نمونه باید تعیین شود. غلظت خیلی بالای آن منجر به تنش آب در بافت می شود و غلظت های کم آن یک لایه مایع روی سطح ژله تشکیل خواهد داد و غرق شدن ریزنمونه در این لایه مایع مانع از مبادلات گازی شده و به کاهش رشد منجر می شود. بعلاوه کشت ریزنمونه روی محیط کشت مایع می تواند باعث شیشه ای شدن[3] کشتها شود علیرغم آنچه بیان شد بعضی از کتشها روی محیط با غلظت کم آگار رشد بهتری دارند. بعنوان مثال ماده خشک در نوک شاخه های Picea obies در حیط کشت با غلظت آگار 125/0 % نسبت به غلظت 1% سریع تر تجمع می یابد. این ممانعت در غلظت بالای آگار احتمالاً مربوط به تجمع سریع فرآورده های زاید( اینورتاز) در سطح زیرین نمونه است و در میحط با غلظت کم آگار ممکن است به دلیل اینکه میزان انتشار مواد به اندازه کافی وجود داشته از بروز چنین حالتی جلوگیری شده باشد. انواع متداول آگار در دمای بیش از 40 در جه سانتیگرا تشکیل ژل می دهند. میزان سختی ژل به PH محیط کشت بستگی دارد. از محیط کشت های تغییر یافته رینرت و ایت با 5/0 آگار برای کشت بافتهای شیمر Picea glouca استفاده شده است. در PH 5/5 محیط کشت کاملاً سفت بود، در صورتی که در PH های 4 یا 5/4 برای نگهداری بافت، محیط کشت بسیار نرم بود. اخیراً کارهای خالص تری عرضه شده که در درجه حرارت پائین تر تشکیل ژل می دهد . محیط کشت بسیار نرم بود، در صورتی که در PH های 4 یا 5/4 برای نگهداری بافت محیط کشت بسیار نرم بود. اخیراً کارهای خالص تری عرضه شده که در درجه حرارت پائین تشکیل ژل می دهند. از این ژل ها می توان برای تثبیت پروتوپلاستها و یا تک سلولی ها درون یک شبکه استفاده کرد ولی به دلیل قیمت بالای آنها، کاربرد آنها محدود به آزمایش های کوچک است.

تصور می شود آگار دارای توانایی جذب مواد است که این توانایی می تواند در حذف مواد زاید سلولی از محیط کشت به روشی مشابه زغال نماید. همچنین این خاصیت می تواند مانع جذب برخی مواد شیمیایی به بافت کشت شده شود. یکی از موادی که به دشت توسط آگار جذب می شود سیتوکینین است. بنابراین غلظت بیشتر آگار جذب سیتوکینین از محیط کشت را برای بافت مشکل تر می کند. همچنین گزارش شده آگار در غشای سلولی سبب قطعیت مثبت می شود. اگرچه مدارک موجود متناقض است. تداومم موفقیت آگار در کشت بافت ممکن است مربوط به جذب پیچیده و قابلیت الکتریکی باشد؛ با این حال برخی محققان به دنبال یافتن جانشین های ارزانتر و بهتر برای آگار هستند که اثرات متقابل پیچیده کمتری با بافت کشت شده نشان می دهد.