مقاله الایزا

اختصاصی از یارا فایل مقاله الایزا دانلود با لینک مستقیم و پرسرعت .

فرمت فایل : WORD (قابل ویرایش)

تعداد صفحات:24

فهرست مطالب:

الایزا    2
تست الایزا (ELISA)    3
برای انجام الایزا:    4
اساس تست Sandwich ELISA برای اندازه گیری سیتوکین    9
مطالبی که در آینده اضافه خواهد شد    9
انواع روشهای الایزا    10
کاربردها    15
کاربرد الایزا    15
اجزای اصلی یک آزمایش الایزا    16
الایزا ریدر یا خوانشگر الایزا    18
سیستم شستشو    18
سیستم توزیع Pipettes Dispensers    19
ارزیابی کلیه تجهیزات توسط یک کیت    21
تست خطی بودن خوانشگر    22
تست دقت خوانشگر و راندمان واشر    23
آزمایش صحت پیپت    24
منابع:    24

الایزا
امروزه الایزا بعنوان یکی از قدرتمندترین روشهای آزمایشگاهی – تحقیقاتی در جهان مطرح می‌باشد.  همانگونه که خواهیم دید این روش از حساسیت و اختصاصیت بسیار بالایی برخوردار است تا بدانجا که هم‌ اکنون روش اصلی در زمینه‌ های مختلف علوم حیاتی از شناسایی و تشخیص ویروسها، باکتری‌ها و انگل‌های پروتوزوا و متازوآ گرفته تا شناسایی مقادیر بسیار کم هورمونها و مولکولهای حیاتی در پزشکی بالینی و آزمونهای تحقیقاتی می‌باشد .
 علاوه براین از سال 1971 که اولین آزمونهای مبتنی بر آنزیم‌های متصل به آنتی‌بادی توسط پرلمان و انگوال شرح داده شد صدها روش کارآمد براساس اصول اولیة الایزا برای شناسایی تعداد بسیار زیادی از ماکرومولکولهای بیولوژیک طراحی و با موفقیت اجرا شده است. امروزه بسیاری از کیت‌های تشخیص بیماریها براساس روش الایزا بنا شده‌اند و سود شرکت‌های بزرگ و معتبر تشخیصی، از محصولات مبتنی بر روش الایزا به میلیون‌ها دلار می‌رسد.
قبل از ورود به مباحث اصلی یک نوع الایزای ساده والبته بسیار رایج بصورت مختصر شرح داده خواهد شد تا فراگیر قادر باشد یک دورنمای کلی از روش الایزا در ذهن خود ترسیم کند.
علامت‌های اختصاری رایج را که بطور گسترده مورد استفاده قرار خواهیم داد مرور می‌نمائیم.
آنتی‌ژن = Ag
آنتی‌بادی = Ab
آنتی‌بادی اولیه = Ab1
آنتی‌بادی ثانویه = Ab2
آنزیم = E
آنزیم متصل شده به آنتی‌بادی = آنتی‌بادی متصل شده به آنزیم = *E = *Ab
آنتی‌بادی علیه آنتی‌بادی دیگر = Anti – Ab
سوبسترای آنزیم = S
سنجش رنگ بدست آمده با استفاده از دستگاه اسپکتروفتومتر = Read
فاز جامد = I
تست الایزا (ELISA)
تست الایزا را در حالت معمول برای ردیابی آنتی ژن یا آنتی بادی بکار می برند بدین ترتیب که یکی از این دو ماده در بستر جامد ثابت می شود و برای ردیابی دومی بکار گرفته می شود، اما اساسا برای ردیابی هر جفت ماده ای که مثل جفت آنتی ژن و آنتی بادی به هم گرایش داشته و قدرت اتصال مناسبی نسبت به هم دارند میتواند بکار گرفته شود (مثلا لکتین به لیگاند مربوطه اش یا مولکول به گیرنده اختصاصی اش) البته این پدیده یعنی اتصال بین دو ماده ای که آنتی بادی و آنتی ژن نیستند اما گرایش به هم دارند اغلب اوقات مشکل آفرین است و برای بالا بردن حساسیت و اختصاصیت اتصال بین آنتی بادی و آنتی ژن در الایزا باید این اتصالات ناخواسته را به طریقی مهار کرده و یا کارهای جبرانی لازم را در نظر گرفت.
1 ) تست الیزا برای جستجوی آنتی ژن:
ELISA روش بسیار حساسی است که (معمولا) برای جستجوی آنتی ژن یا آنتی بادی بکار میرود در تحت شرایط تنظیم شده (از نظر غلظت یونی و pH) پروتئین ها (آنتی ژن یا آنتی بادی) به طور خودبخود تمایل دارند که به بستر جامد (در این تست plate هایی از جنس پلی استیرن) متصل شوند، ماهیت این اتصال بخوبی معلوم نشده است اما برگشت پذیر بوده و با استفاده از pH های بالاتر یا پایین تر و استفاده از غلظت های یونی بالا اتصال قطع میشود این نوع اتصال خودبخودی اگر چه ظرفیت محدودی دارد ولی با بکارگیری سیستم های تقویتی مناسبی مثل سیستم آنزیم-سوبسترا این اتصالات وسیله بسیار خوبی برای طراحی سیستم الایزا گردیده است.
برای انجام الایزا:
1 ) ابتدا باید پروتئین مورد نظر را به کف پلیت چسباند.
2 ) نقاط اتصال باقی مانده را باید با محلول پروتئینی مناسب مسدود کرد.
3 ) محلول مورد آزمایش را اضافه کرد تا دو ماده همدیگر را پیدا کرده و متصل شوند
4 ) سیستم های تقویتی اولیه را برای افزایش حساسیت آزمایش بکار گرفت
5 ) سیستم آنزیمی نهایی را به راه انداخته و رنگ نهایی تولید شده را اندازه گرفت
حال این 5 مرحله به تفکیک توضیح داده می شوند:
1 ) اتصال پروتئین به کف پلیت (Coating):
آنتی ژن (یا آنتی بادی) در مقادیری در حدود میکروگرم به داخل چاهک پلیت الایزا اضافه شده و فرصت داده میشود تا به مقدار کافی به کف چاهک (well) متصل شود برای اینکار بسته به نوع پروتئین بافرهای مختلفی به کار گرفته می شود و غلظت پروتئین نیز باید مناسب سازی شود در مقادیر بسیار پایین حساسیت ردیابی پایین می آید و در مقادیر بالای آنتی ژن اتصالات سستی نیز برقرار میشود که در مراحل بعدی کنده شده و هنگام شستشو آنتی ژن همراه با آنتی بادی اختصاصی دفع می شوند و لذا حساسیت تست مجددا پایین می آید.